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大鼠環(huán)磷酸腺苷（cAMP）ELISA試劑盒實驗步驟
發(fā)布時間： 2014-07-17 點擊次數(shù)： 1741次大鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒 Rat cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit ，規(guī)格：96T/48T，產(chǎn)品別名： 大鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)檢測試劑盒
大鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒原理的簡要說明書：cAMP(環(huán)磷腺苷)。環(huán)磷腺苷是細(xì)胞內(nèi)的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)，是葡甲胺作為配基與環(huán)磷酸腺苷(cAMP)結(jié)合在一起，通過增強(qiáng)cAMP的脂溶性，提高了cAMP的純度，易于透過細(xì)胞膜，使cAMP的藥理作用得到zui大限度的發(fā)揮。cAMP以微量廣泛存在于動植物細(xì)胞及微生物中，是代謝調(diào)節(jié)控制的重要因子之一。在生物體內(nèi)由腺苷三磷酸通過腺苷酸環(huán)化酶的催化而形成。
大鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒操作步驟
1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2．根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9．在450nm波長處測定各孔的OD值。
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