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在試驗(yàn)中EISA試劑盒的條件挑選
發(fā)布時(shí)間： 2019-10-15 點(diǎn)擊次數(shù)： 1950次在ELISA試劑盒中，進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)條件的挑選是很重要的，其間包括:
（1） 固相載體的挑選：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一試驗(yàn)條件下進(jìn)行反響，調(diào)查其顯色反響是否均一性，據(jù)此判明其吸附功能是否良好。
（2） 包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)刻及其蛋白量也有一定影響,一般多選用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，調(diào)查陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。挑選OD值大而蛋白量較少的濃度。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml。
（3） 酶符號(hào)抗體作業(yè)濃度的挑選：首先用直接ELISA試劑盒法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶符號(hào)抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號(hào)抗體分別為不同的稀釋度）在正式試驗(yàn)系統(tǒng)里地滴定其作業(yè)濃度。
（4） 酶的底物及供氫體的挑選：對(duì)供氫體的挑選要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反響，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)留意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)刻后，應(yīng)參加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反響。通常底物作用時(shí)刻，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前參加。