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研域小講堂：該怎樣挑選適宜的HA標(biāo)簽抗體？
發(fā)布時(shí)間： 2019-09-20 點(diǎn)擊次數(shù)： 2454次HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛使用于多種細(xì)胞類(lèi)型，相應(yīng)的HA標(biāo)簽抗體也被廣泛使用。HA 標(biāo)簽抗體能特異識(shí)別C結(jié)尾或N結(jié)尾帶有HA標(biāo)簽(HA-tagged)的交融蛋白，也能夠用于檢測(cè)和HA tag交融表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)ding位，以及純化、定性或定量檢測(cè)HA tag交融表達(dá)蛋白等。
挑選適宜HA標(biāo)簽抗體需求考慮的要素
我們?cè)谔暨x一個(gè)標(biāo)簽抗體時(shí)，首要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)使用上的需求。這兒需求考慮的要素包含，HA抗體的使用檢測(cè)類(lèi)型、HA抗體的克隆性及制備來(lái)歷等。比方該HA抗體是否能用于免疫熒光IF的檢測(cè)？是否能夠用于Western Bloting和免疫沉淀IP實(shí)驗(yàn)？是否需求HRP偶聯(lián)的單克隆HA標(biāo)簽抗體？還是一個(gè)兔來(lái)歷的HA多抗更適宜？
一般來(lái)說(shuō)，使用類(lèi)型越多，在使用過(guò)程中的挑選地步就越大，而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性都要優(yōu)于多克隆抗體，而多克隆。別的，抗體的效價(jià)也是調(diào)查該抗體性?xún)r(jià)比的重要方面，也即相當(dāng)于實(shí)際使用時(shí)的稀釋比率。
一個(gè)效價(jià)高的100μl HA抗體（假如其WB檢測(cè)的稀釋比率是1:5000，終究使用液相當(dāng)于500ml），要比效價(jià)低的1ml的HA抗體（假如WB檢測(cè)的稀釋比率是 1:200，終究使用液相當(dāng)于200ml）性?xún)r(jià)比更高。因此在挑選抗體的時(shí)分，不但需求考慮抗體的量，還需求考慮抗體的效價(jià)，即不同使用的主張稀釋比率。