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ELISA試劑盒抗體反應(yīng)使抗原固相化
發(fā)布時(shí)間： 2017-10-13 點(diǎn)擊次數(shù)： 1898次ELISA試劑盒的基本原理有三條：
（1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分互相吸附，并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性；
（2）抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶銜接構(gòu)成酶聯(lián)絡(luò)物，ELISA試劑盒而此種酶聯(lián)絡(luò)物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
（3）酶聯(lián)絡(luò)物與相應(yīng)抗原或抗體聯(lián)絡(luò)后，可依據(jù)參與底物的顏色反應(yīng)來判定是不是有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯現(xiàn)試驗(yàn)成果。法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所導(dǎo)致的盛行癥、寄生蟲病及非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，ELISA試劑盒依據(jù)現(xiàn)已運(yùn)用的成果，認(rèn)為法具有活絡(luò)、特異、簡略、快速、安穩(wěn)及易于自動(dòng)化操作等特征。不只適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天以內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清盛行病學(xué)查詢。
ELISA試劑盒因此含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改進(jìn)，重復(fù)性亦佳。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附聯(lián)絡(luò)的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的效果于。可將聚苯乙烯板先經(jīng)紫外線照射（例如30W紫外燈，75cm照射12小時(shí)），以增加其吸附功能。例如，在檢查抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，ELISA試劑盒而廣泛的固相載體一般不能直接與核酸聯(lián)絡(luò)。換言之，包被就是抗原或抗體聯(lián)絡(luò)到固相載體表面的進(jìn)程。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí)，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分露出，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以選用直接的捕獲包被法，即先將關(guān)于該抗原的特異抗體作預(yù)包被，這今后通過抗原。也可用親和素生物素體系作直接包被，即用親和素先包被載體，然后參與生物素化的DNA，這種包被方法均勻、結(jié)實(shí)，已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。